三、冬虫夏草和蝠蛾昆虫人工培育技术

　　(一)冬虫夏草茵的寄主昆虫饲养繁殖技术要进行冬虫夏草的人工培育，首先必须大量人工饲养寄主一一蝠蛾属昆虫。蝠蛾一生中有98%的时间都在土壤内生活，仅有2.5一13d的成虫期营地面生活。所以，这类昆虫的人工饲养管理主要是在土壤中开展。

　　1.蝠蛾的饲养工具
　　(1)蝠蛾卵的饲养工具。饲养蝠蛾卵可用两种方法，一是用直径 15一20cm的玻璃培 养皿，垫上2一3层滤纸，皿内放一块吸水棉保持湿度，每皿可饲养200一500粒卵。此法利于观察，但难掌握湿度。二是用l0cm xX5一8cm的广口瓶或者25cm x 30cm的玻璃饲养 缸，内置3一5cm厚的过筛细腐殖土，种上1一2棵珠芽寥植物，把卵放养于土表至lcm深的土层中，每瓶可饲养300一1000粒卵；饲养时只要掌握住植物不枯萎，即可不加湿度。此法卵的孵化率高，但观察和移植幼虫对比较困难。
　　(2)幼虫的饲养工具有以下4种。
　　a.玻璃养虫缸：用18一25cmX30一35cm的玻璃缸，也可用标本浸泡缸，放置土壤15一25cm，种上幼虫取食的植物，把刚孵化幼虫移入缸内，每缸可饲养10一30头幼虫。
　　b.地下养虫箱：箱一般高30一50cm，宽20一25cm，厚3一5cm。饲养箱骨架用钢筋 焊成，上面钢筋做成提手，便于提动；宽的两面用3一5mm玻璃，便于观察虫体活动；底 和两个侧面装上16孔目的铜纱网，便于水分渗入。然后装上土壤，种植饲料植物，每箱放养20 一50头幼虫；在较坚实的地上挖一个比饲养箱体积稍大和深的槽，把养虫箱放入槽中，观察时将养虫箱提出地面，抹去外表玻璃上的土壤，即可清楚看到幼虫活动情况。
　　c.大型养虫笼：在半自然的状况下，选择一块排水好、土质疏松的场地，挖长12一l5m、宽2一3m、深4Ocm的深槽，底部和四周垫上尼龙纱网(最好用双层，小虫不易钻出)，再把疏松的腐殖土铲进填平，种上幼虫食物，放入幼虫饲养，每平方米可放养30一50头；该法有利于大规模饲养，但观察困难。
　　d.用各类盆具****饲养：把植物饲料洗净放入盆中，放入幼虫饲养，盆口覆盖一层黑布或者黑纸遮光。此法利于生活史观察，但要注意勤换饲料和清除粪便。
　　(3)蛹和成虫的饲养工具。制作长50cm、宽50cm、高55一60cm的养虫箱。底部用薄铁板或双层铜纱网封底；顶和四周用铁纱或尼龙纱封盖，前面可制成一道活动纱网门。在箱底放入10一20cm的土壤，种上植物，把蛹和成虫放养土中，此法可进行密植饲养。

　　2.饲养技术要点
　　(1)土壤的选择。土壤是蝠蛾昆虫一生中最主要的活动场所。土壤条件是否适合该虫生活是人工饲养成活率高低的关键之一。最适宜蝠蛾生长的是高山草甸土；次之是流石滩和草甸混合土；再次之是高山棕色、暗棕色林土，其他土壤对此虫生长不良。
　　(2)食料的选择。幼虫最喜取食圆穗蓼、珠芽蓼、黄芪、小大黄等植物的嫩根芽。由于蝠蛾昆虫是一类杂食性昆虫，在无上述植物的地方，可用禾本科 (如青稞、麦、谷芽等)；十字花科、莎草科的嫩根饲养。在中、低海拔地区(适宜生活的温度下)用土大黄、胡萝卜、白萝卜、白薯 (红苕)、马铃薯、苹果等饲喂也能正常生长发育，最好为土大黄、胡萝卜和白薯三类。
　　(3)温、湿度的选择。蝠蛾昆虫是一类耐低温而怕高温的昆虫。最适宜在15一19C中生活成长；此虫最适宜空气湿度75%一85%，土壤含水量40%一45%之间。

　　3.管理技术
　　(1)成虫期。成虫不取食任何食物，只要保持水分和适宜温度即能正常成活和产卵。但蛾子栖息环境与产卵量有关。成虫最喜选择有杜鹃和蝠蛾幼虫取食的蓼科等植物根旁产卵，所以在蛾子交配产卵前植上几株相关植物最佳；另外不能有强光影响。
　　(2)卵期。要使卵能正常孵化，一定要掌握好适宜的温、湿度。
　　(3)幼虫期。幼虫由于生长期长，而且虫体壁薄而易破，饲养时一定要细心，除了必要的观察、换土和换食料外，尽量减少翻动。幼虫的饲养关键是初孵的幼龄时期，初孵幼龄虫要给足细小鲜嫩、湿度不高的食物；土壤最好经过筛检，以免粗硬物擦伤主体。此外，为了延长食料和土壤不霉坏，更换前用紫外灯照射杀菌l5min，土壤也可在阳光下暴晒1一2h后再用。
　　(4)蛹期。养蛹时，把养蛹器皿内的土壤压实，然后用与蛹粗细的木棍人工造一土室，土室略斜，深约2一3cm，每室放一蛹，放蛹时，蛹头向土表面，上用细土盖住。蛹的温湿度，可控制在大气湿度80%一85%，土壤含水量42一45%之间，温度18一22℃之间。

　　(二)冬虫夏草菌的人工培养技术

　　要获得纯正的冬早夏草菌种必须进行人工的分离、纯化、复壮、保存等工作。

　　1.分离冬虫夏草菌的技术与条件
　　(1)材料要求。获得纯的菌种对材料要求比较严格；一般来说如果是进行冬虫夏草的组织块分离法，最佳的分离材料是每年的10月底至11月份，青藏高原高寒草甸土壤刚开始冻结时期采的材料，这个时期冬虫夏草菌刚感染蝠蛾幼虫进入僵虫期不长时间，嫩小的子座芽刚长出虫头部0.2一0.5cm，虫体内其他杂菌较少，最易进行分离。如果是第二年5一6月份采的材料，僵虫体和子座上都有许多种杂菌共生或腐生，难获得纯菌种。若用子囊孢子进行分离培养，材料最好在每年的7月中、下旬子囊孢子刚有部分成熟期采集分离培养。
　　(2)操作方法。有以下3步。
　　a.僵虫体 (即菌核)的分离：分离前，用水刷洗干净主体表面，再用无菌水清洗2一3次；用0.1%一0.2%的升汞溶液，对分离材料进行约3一5min的表面消毒；再用无菌水清洗。选取与胸足为界的前段部分。用解剖刀切去表皮，避开消化道，取血腔菌丝切成芝麻粒大小，压入平板培养基中，每皿1一2粒。置于15一19℃中培养，待菌落长出0.2一0.5cm时，挑选少量菌丝反复在平板培养基上分纯2一4 次，确定无其他杂菌后，移入试管保存和培养。
　　b.子座芽分离：从僵虫头顶切下洗净的子座芽，置入0.1%升汞液中消毒2一3min，用无菌水洗净，切取中间部位组织块压入培养基中；培养条件同a。
　　c.子囊孢子分离：用透明纸袋套住子囊孢子成熟的子座，让子囊孢子弹跳粘贴在纸袋上，然后，把有子囊孢子的纸袋浸入25%的葡萄糖液中，洗下孢子，放入15一19℃中培养，每天镜检，当袍子萌发时，用微吸管吸单个孢子滴于平板中培养；培养条件同a。也可把整个成熟的冬虫夏草带回室内，用棉纸把僵虫和连虫体的子座包住，仅留出有孕部分，在无菌室中，横放，下置一片载玻片，随时保持主体湿度；每天镜检，当看到子囊孢子弹到玻片时，用微吸管吸到平皿的培养基中培养；培养条件同a。
　　(3)培养基的选用。
　　a.马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)，此种配方是所有虫草菌属真菌的通用培养基，在分离培养初期可用该配方，不过菌种生长不十分旺盛，而且易老化、退化。
　　b.加富培养基 (1)：多性蛋白脐10g，葡萄糖50g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，活蚕蛹30g，生长素0.5μg，琼脂20g，加水1000mL，pH： 5.0。
　　加富培养基 (Ⅱ)：蛋白脯40g，葡萄糖40g，去皮鲜马铃薯100g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，牛肉膏10g，生长素0.5μg，蝠蛾活幼虫 (磨碎)30g，琼脂20g，高寒草甸土浸出液10OOmL，pH：5.0。
　　在加富培养基上，菌落比在PDA培养基上生长旺盛和迅速；加富 Ⅱ号又优于Ⅰ号。

　　2.生长特性 冬虫夏草菌的分离培养中须掌握温度、pH值、光照、碳和氮源及无机盐的利用状况。
　　(1)不同温度对菌丝生长的影响。冬虫夏草菌喜偏低温度。在0 一4℃时能缓慢生长；5一8℃时生长速度加快；10一19℃是此菌较适生长发育的范围;最佳生长温度为15一l9℃。超过20℃菌丝猛长，菌落由白色变为灰黑或棕****，开始出现变异，所以不宜高温培养。
　　(2)对pH值的要求。冬虫夏草菌是一种偏酸性真菌，最适pH值为 5.0一6.0，当pH值为4.5以下和6以上时，随着增高或降低，生长缓慢至不生长。