|
我们发现，灌胃松杉树芝多糖（50～200mg/kg）可显著增强二硝基氯苯（DNCB）所致小鼠迟发型皮肤过敏反应（DCH），拮抗环磷酰胺对DCH的抑制作用。每日强迫小鼠在冷水中游泳5min，共10d，即出现明显的应激性免疫功能抑制，DCH反应可降低50%左右。在应激同时，每日灌胃松杉树芝多糖（50mg/kg，100mg/kg）可使DCH反应维持在接近正常的水平。表明松杉树芝多糖可拮抗应激所致细胞免疫功能抑制。从松杉树芝菌丝体和发酵液中所获多糖亦有类似的增强细胞免疫效应作用。
我们还证明，灵芝多糖BN3A，BN3B和BN3C（1μg/ml，5μg/ml）均可显著促进刀豆素A（ConA）诱导的C57BL/6j小鼠的脾淋巴细胞增殖反应。在浓度为30μg/ml时，BN3A和BN3C还可部分拮抗氢化可的松对淋巴细胞增殖反应的抑制作用。我们还发现，与3月龄小鼠相比，14月龄小鼠的ConA诱导的淋巴细胞增殖反应降低26.5%，此三种多糖在浓度为1和2.5μg/ml时，均可使之显著恢复。最近，我们以同种异型抗原刺激的混合淋巴细胞培养反应（MLR）为模型，观察灵芝多糖GL—B对细胞免疫功能的影响。结果证明，GL—B（50～800μg/ml）可浓度依赖性的促进小鼠的MLR，并可反转小剂量环孢霉素A（0.01μg/ml)对MLR的抑制作用，并使之恢复正常。当环孢霉素A的浓度增至0.1～1μg/ml时，对MLR的抑制作用达80%，对此GL—B几无拮抗作用。GL—B亦可部分拮抗氢化可的松对MLR的抑制作用。抗肿瘤药氟尿嘧啶、丝裂霉素C和阿糖胞苷均可明显抑制MLR，GL—B可剂量依赖性地拮抗这些药物对MLR的抑制作用（表7-3）。同样，我们亦发现，24月龄小鼠的MLR较3月龄小鼠降低35.3%，GL—B可使之恢复（表7-4）。
表7-3 灵芝多糖GL—B对丝裂霉素C、氟尿嘧啶和阿糖胞苷
所致混合淋巴细胞反应（MLR）抑制的恢复作用
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组别 |
药物浓度（μg/ml） |
[3H]TdR摄取（dpm） |
|
对照 |
- |
31361±4242 |
|
丝裂霉素C（抑制对照） |
0.01 |
16842±1266+++ |
|
丝裂霉素C+GL-B |
0.01+50 |
19003±978** |
|
丝裂霉素C+GL-B |
0.01+100 |
24209±1505*** |
|
丝裂霉素C+GL-B |
0.01+200 |
27606±2372*** |
|
对照 |
- |
28946±1527 |
|
5-氟尿嘧啶（抑制对照） |
0.1 |
16250±1614+++ |
|
5-氟尿嘧啶+GL-B |
0.1+50 |
20875±1750*** |
|
5-氟尿嘧啶+GL-B |
0.1+100 |
26201±2130*** |
|
5-氟尿嘧啶+GL-B |
0.1+200 |
28823±1728*** |
|
对照 |
- |
23678±1348 |
|
阿糖胞苷（抑制对照） |
0.01 |
13092±1973+++ |
|
阿糖胞苷+GL-B |
0.01+50 |
17658±2420** |
|
阿糖胞苷+GL-B |
0.01+100 |
24380±2949*** |
|
阿糖胞苷+GL-B |
0.01+200 |
30030±4649*** |
x - ±s,n=6,+++P<0.001与对照比较, **P<0.01,***P<0.001与抑制对照比较。
表7-4 灵芝多糖GL—B对24月龄老年小鼠的同种
异型抗原刺激的混合淋巴细胞反应（MLR）的影响
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组别 |
鼠龄（月） |
浓度（μg/ml） |
[3H]TdR摄取×10-3（dpm） |
|
年轻对照 |
3 |
- |
45.4±2.1 |
|
老年对照 |
24 |
- |
19.4±3.8+++ |
|
GL-B |
24 |
50 |
34.8±4.5 |
|
GL-B |
24 |
100 |
36.1±2.6*** |
|
GL-B |
24 |
200 |
40.2±4.2*** |
x - ±s,n=6,+++P<0.001与年轻对照比较,**P<0.01,***P<0.001与老年对照比较。
我们还采用抗L3T4及抗Lyt2单克隆抗体和间接荧光免疫法检测了混合淋巴细胞培养中T细胞亚类的数量。结果指出，GL—B（50～200μg/ml）可显著增加其中总T细胞的回收量以及L3T4+细胞和Lyt2+细胞的回收量，Lyt2+细胞的百分比亦明显增加。空斑减少试验还显示，GL—B可显著增强细胞毒T细胞（CTL）的功能，在浓度为200μg/ml时，其杀伤活性增加100%。小鼠L3T4+细胞属于T辅助细胞（Th），这一结果说明，GL—B能促使Th细胞增殖。而T抑制细胞（Ts）和CTL均带有Lyt2+抗原，故GL—B促进Lyt2+细胞增殖的确切含义尚待研究，但由于我们又观察到GL—B可增强CTL的杀伤活性，表明GL—B增加的Lyt2+细胞中，至少有一部分属于CTL细胞。
体外试验亦证明，树舌多糖可增强ConA刺激的小鼠脾细胞增殖反应。薄芝液对ConA刺激的脾细胞增殖反应的影响视所用浓度而异，低浓度（1.5μg/ml）时有促进作用，高浓度（25μg/ml）则抑制之。
灵芝蛋白LZ—8在体外对小鼠脾细胞有强大的促有丝分裂作用，最适刺激浓度为3.3μg/ml。LZ—8尚可增强ConA和LPS的促有丝分裂作用。
四、促进免疫细胞因子的产生
我们发现，灵芝多糖BN3A，BN3B和BN3C（0.05～1μg/ml）均可显著增加C57BL/6j小鼠脾细胞在ConA存在条件下的IL—2产生，并可部分地拮抗环孢霉素A和氢化可的松对小鼠脾细胞产生IL—2的抑制作用。与3月龄小鼠比较，19月龄小鼠脾细胞IL—2产生减少17.6%～20.3%，此三种多糖均可使之恢复至3月龄小鼠的正常水平。
在混合淋巴细胞培养中，T辅助细胞（Th）受到同种异型抗原刺激后，在巨噬细胞分泌的IL—1协同下，发生增殖反应并合成分泌IL—2。在反应体系中加入终浓度为200μg/ml的GL—B，其作用呈双向反应。即在培养的前24h，GL—B可促进脾细胞合成分泌IL—2，24h以后则逐渐减少合成分泌IL—2。当固定培养时间为12h，改变GL—B的浓度，则可见GL—B呈浓度依赖性地促进脾细胞合成分泌IL—2（表7-5）。由于GL—B对IL—2依赖株HT2细胞以及同种异型抗原或ConA活化的脾细胞均无促增殖作用，故我们认为GL—B不能促进活化细胞的IL—2受体表达。
表7-5 灵芝多糖GL—B对小鼠混合淋巴细胞培养上清液
中白细胞介素质2（IL—2）活性的影响
|
组别 |
浓度（μg/ml） |
IL-2活性（dpm） |
|
对照 |
- |
2044±167 |
|
GL-B |
25 |
2386±208* |
|
GL-B |
50 |
2930±125*** |
|
GL-B |
100 |
3044±192*** |
|
GL-B |
200 |
3607±339*** |
x - ±s,n=6,*P<0.05, ***P<0.001与对照比较。
最近，我们证实，未纯化的小鼠脾细胞在体外培养时可发生自发性增殖，即自身混合淋巴细胞培养反应（A MLR），GL—B亦可显著促进这种反应。而更为有意义的是，24月龄老年小鼠的未纯化脾细胞的自发性增殖和IL—2分泌均较3月龄年轻小鼠显著减少，而GL—B则可剂量依赖性地使之逐渐恢复（表7-6）。
表7-6 灵芝多糖GL—B对老年小鼠脾细胞自发增殖和
白细胞介素质2（IL—2）产生的影响
|
组别 |
鼠龄
（月） |
浓度
（μg/ml） |
[3H]TdR摄取×10-3
（dpm） |
IL-2活性×10-3
（dpm） |
|
年轻对照 |
3 |
- |
24.8±4.7 |
8.3±1.4 |
|
老年对照 |
24 |
- |
18.0±3.4+ |
5.8±1.0+ |
|
GL-B |
24 |
50 |
22.1±2.7* |
7.3±1.2* |
|
GL-B |
24 |
100 |
24.9±3.8** |
8.2±1.0** |
|
GL-B |
24 |
200 |
26.4±2.4*** |
9.0±1.0*** |
x - ±s,n=6,+P<0.001与年轻对照比较,*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001与老年对照比较。
我们还发现，GL—B与小鼠腹腔渗出细胞（主要为巨噬细胞）共同培养24h后，上清液和腹腔渗出细胞内IL—1明显增加，说明GL—B可促进腹腔渗出细胞合成和分泌IL—1（表7-7）。
表7-7 灵芝多糖GL—B对小鼠腹腔渗出细胞合成和分泌
白细胞介素质1（IL—1）的影响
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组别 |
浓度
（μg/ml） |
IL-1活性（dpm） |
|
上清液 |
细胞内 |
|
对照 |
- |
9328±752 |
17805±1893 |
|
GL-B |
50 |
12290±1176*** |
18641±2042 |
|
GL-B |
100 |
15046±1645*** |
20908±2122* |
|
GL-B |
200 |
16759±2786*** |
23218±1530*** |
|
