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草坪草种子检验技术

种子生活力(Seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力。许多草坪草种子因存在着休眠,特别是刚收获的草坪草种子,发芽率很低,但实际上种子具有生活力,只是处于休眠状态暂时不能发芽。休眠种子可借助于各种预处理打破休眠,进行发芽试验,但这样往往需要延迟发芽时间。而种子贸易中,常因时间紧迫,不可能采用正规的发芽试验测定发芽率。在收获与播种间隔短的情况下,发芽试验会耽搁农时。所以常采用生物化学速测法测定种子生活力。目前常用于草坪草种子生活力测定的方法是四唑染色图形技术。将氯化三苯基四氮唑(TTC)溶于水,水的pH值应在6.57.5之间,最好为7.0。溶液浓度在0.1%1.0%范围内,通常0.1%溶液用于切开的种子,1.0%溶液用于整粒种子。高浓度(1.0%)溶液需使用缓冲溶液。配制方法:母液Ⅰ,称取9.078gKH2PO4溶于1000mL蒸馏水;母液Ⅱ,称取9.472gNa2HPO411.876gNa2HPO4·2H2O溶于1000mL蒸馏水。母液Ⅰ与母液Ⅱ以2:3混合,然后称1gTTC,将该缓冲液定溶至100mL。其他浓度的TTC溶液也可由该母液稀释。从净种子中数取400粒种子,分成4个重复,每一重复100粒。预先湿润,吸湿种子有利于进行切刺处理,不致于严重损伤种子器官或组织,并使染色更为均匀,有利于鉴定。有些种子吸湿处理前需除去颖壳或种皮。许多草坪草种子在染色前需进行切刺处理,使其组织暴露出来,以利于四唑溶液的渗入,并便于鉴定。目前切刺方法如穿刺、纵切、横切均已标准化,这样有利于识别切刺处理中引起的组织损伤。将经过预先湿润和切刺处理的种子样品放入培养皿,按要求加入一定浓度的四氮唑溶液,使四氮唑溶液完全淹没种子,溶液不能直接暴露于光下。染色时间的长短因样品处理方式、四氮唑溶液浓度和温度而异,在2045℃范围内,温度每增加5℃,染色时间则减半,通常染色温度为3035℃。当到达规定时间,或染色已很明显时,倒去四氮唑溶液,用清水冲洗后即可观察鉴定。在立体解剖镜下进行观察鉴定,辨别有生活力和无生活力的种子。根据种胚主要结构的染****况进行判断,如对禾本科草坪草种子的胚芽、胚根、胚轴和盾片及豆科草坪草种子的胚根、胚芽、胚轴和子叶等部位进行仔细的观察。通常,胚的全部或主要结构染成鲜红色的,为有生活力的种子;凡胚的主要结构之一不染色,或染成浅色斑点者为无生活力的种子。禾本科草坪草种子的胚芽、胚根、盾片中央不染色,或盾片末端、胚根不染色斑点超过1/3的为无生活力的种子。豆科草坪草种子胚根和子叶末端不染色的面积超过1/3,胚轴或接近胚芽部分的子叶不染色者为无生活力的种子。对带有稃壳的禾本科草坪草种子及小粒豆科草坪草种子,需用乳酸苯酚透明剂使稃壳、胚乳或种皮、子叶变为透明,以便观察种胚的染****况,正确判断种子的死活。乳酸苯酚透明剂由20mL乳酸、20mL苯酚、40mL甘油和20mL水混合配制成的。使用方法是,四氮唑反应结束后,去除溶液,并用滤纸吸去残液,将种子集中起来加入24滴乳酸苯酚,适当摇晃,使透明剂与种子充分接触,然后置于38℃恒温箱3060min,取出培养皿后可鉴定。

五、种子水分测定

种子水分(Seed moisture content)又称种子含水量,是指种子样品中含有水的重量占供检种子样品重量的百分率。种子含水量的测定对指导种子收获、清选、药物熏蒸及种子贮藏、运输和贸易都有着及其重要的作用。国际上长期采用烘干减重测定法作为标准水分测定方法,是根据样品烘干后失去水分的重量计算水分百分率的。

1. 低恒温烘箱法

1)试样称取:首先选择样品盒,并编号,注在盒上和盒盖上。在103℃烘箱内烘1h,之后于干燥器内冷却3045min,取出样品盒称重并记录编号及盒重。从已充分混合(密封的样品容器内充分混合均匀)的样品中称取两份试验样品,放入盒内并均匀地摊在盒底上,作记录,每份试验样品约为5g,称重保留3位小数。

2)烘干称重:将样品盒迅速放入烘箱启开盒盖,保持103±2℃,烘干17±1h,烘箱回升至所需温度时,开始计算烘干时间,到达规定时间后,盖好样品盒盖,放入干燥器冷却3045min。冷却后连同样品盖一起称重。称重时室内相对湿度应低于70%

3)结果计算:根据烘后减少的水分重量计算含水量,保留1位小数。

种子水分(%)=(M2M3/M2M1)×100

式中:M1——样品盒连盖的重量(g);

      M2——样品盒连盖及样品烘前重量(g);

      M3——样品盒连盖及样品烘后重量(g)。

2. 高恒温烘箱法

测定程序与低恒温烘箱法相同,不同点是提高烘箱温度,加速种子内水分蒸发,在短期内测得种子水分。首先预热烘箱到140145℃,称取样品后装入样品盒,迅速放入烘箱,温度在510min回升到130℃时开始计算时间,在130133℃下烘60min后,用坩埚钳或戴上工作手套取出样品盒,盖上盒盖,冷却后称重,并计算水分百分率。早熟禾属草坪草种子比较适于用高恒温烘箱法测定水分。

3. 两次烘干法

对于大粒种子必须进行磨碎处理,才能进行烘干测定水分。但如果需要磨碎的种子,其水分高于17%(禾本科草坪草种子水分高于18%,豆科草坪草水分高于16%)时,必须进行预先烘干,防止磨碎过程中水分的散发,提高水分测定的准确性。其方法是先称取整粒种子20g放入130℃烘箱内,烘510min后取出,晾干2h称重,然后将预烘过的种子磨碎,称取4.55 g试验样品两份,并于103±2℃或130133℃烘箱内烘干,冷却、称重后计算水分百分率。

公式1:种子水分(%)=(W·W2W1·W3/W·W2)×100

其中:W——整粒样品重量(g);

W1——整粒样品预烘后重量(g);

W2——磨碎试验样品重量(g);

W3——磨碎试验样品烘后重量(g)。

公式2:种子水分(%)=S1S2S1·S2/100

式中:S1——第一次整粒种子烘后失去的水分(%);

S2——第二次磨碎种子烘后失去的水分(%)。

六、种子千粒重测定

种子千粒重是种子活力的重要指标之一。种子千粒重是指在国家标准规定的种子水分含量的标准内,每1000粒种子的质量,以g为单位。

测量种子质量也可以用种子容重来表示。种子容重是指单位容积内种子的绝对质量。通常以每升种子质量克数来表示。

测定方法是将经过种子净度测定的种子,采用随机取样方法,取试样二份,每份试样种子粒数,由种子大小而定,大粒种子每份为500粒,中、小粒种子为1000粒。

用感量为0.01g的天平称重。试样质量在1g以下的称重数取小数点后四位。二次重复分别称重,取平均数。

种子容重的测定,是采用种子容重的专用容器——容重器来测定,方法是用一容重器取净种二份,分别称重取平均数,以g来表示。

七、种子储藏和运输

种子的安全储藏和运输对保持种子的活力和寿命至关重要。种子储藏包括种子在母株成熟开始至播种利用的全过程。在此期间要经历不可逆转的劣变过程。通常认为劣变起始于种子生理成熟并导致活力下降亦即发芽率、种苗生长势及生产潜力下降。这种劣变过程的速度和种子储藏和运输的外部条件密切相关,所以种子储藏的基本要求如下:

1. 库房的准备

清仓消毒。入库前库内的一切杂物全部清除干净,以防将种子污染和混杂;第二,要进行消毒。即喷洒药物和熏蒸,以杀菌和灭虫,确保库房卫生整洁。

2. 种子的入库前准备

充分晾晒、清选和干燥。草坪种子储藏的一般含水量要求在9%左右进行包装和标签。

3. 种子入库

按品种分别堆放,堆间留出一定的间隔,以便通风、管理、检查及存取。

4.       种子的入库登记档案

种子入库后必须建立种子档案和填写标签。标签挂在种子包和种子堆上。种子档案和种子标签填写项目如下:

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